毛細管電泳儀的操作莫大意,要注意這些細節(jié)
毛細管電泳儀是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅(qū)動力的新型液相分析技術,是分析科學中繼液相色譜之后的又一重大進展,它使分析科學得以從微升水平進入納升水平,并使單細胞乃至單分子分析成為可能,使長期困擾我們的生物大分子如蛋白質(zhì)的分離分析也因此有了新的思路。該儀器可用于對有機化合物、無機離子、中性分子、手性化合物、蛋白質(zhì)和多肽、DNA和核酸片段的分析。廣泛應用于環(huán)境保護、生物化學、醫(yī)學衛(wèi)生、臨床檢測、司法、食品衛(wèi)生、藥品檢測、農(nóng)業(yè)化學等領域。
分析原理:
檢測原理基于被測組分和背景電解質(zhì)的吸光度不同,當被測組分通過檢測窗時,吸光度發(fā)生的變化服從朗伯-比爾定律,即在一定的實驗條件下,吸光度與被測組分的濃度成正比。
毛細管電泳儀對進樣技術要求很高,進樣操作事項如下:
1、進樣區(qū)帶越小越好:
無論采用何種進樣方式,毛細管插入樣品溶液的深度一般要少于毛細管總長度的1%~2%,以盡量減少樣品溶液經(jīng)毛細吸附進入毛細管而影響進樣量的性。樣品管中溶液少為5μL,進樣體積為1~50nL。
2、進樣時間以短為宜:
通常進樣時間為0.5~1s,此時毛細管粘附的樣品量相對于吸入的體積可忽略不計。雖然進樣時間可至±0.1s,但由于毛細管插入樣品管時不可避免地會粘附一些溶液,進樣時間過短會影響分析的重復性。
3、樣品預濃縮:
受毛細管內(nèi)總體積的制約,對于濃度很稀的樣品,不能像HPLC那樣可加大進樣量來提高檢測靈敏度,但可采取一些措施來改善。
4、毛細管插入樣品溶液后,應立即開始進樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則會產(chǎn)生毛細作用和虹吸現(xiàn)象,引起誤差并使譜帶展寬。
5、電極不要和毛細管接觸,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應保持平衡。
6、使毛細管電泳儀盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度,而影響進樣量的恒定。