毛細管電泳正確的使用至關重要
毛細管電泳在新藥研發(fā)領域顯示出重要的應用前景。CE采用水介質作為實驗系統(tǒng),保證了藥物篩選在與生命介質相似的環(huán)境中進行,優(yōu)于其他傳統(tǒng)的體外篩選方法。
除了保持所選分子和靶點的生物活性外,CE篩選過程還強調配體和受體之間的相互作用。該電泳藥物篩選主要針對與藥理學理論相關的重要參數(shù),如結合常數(shù)KB、結合速率常數(shù)Kon和離解速率常數(shù)koff,有利于模擬和預測靶向藥物在體內的相互作用過程。
毛細管電泳的正確使用方法如下:
1、儀器預熱及毛細管沖洗
打開儀器和支持工作站。當工作溫度設為3℃,不加電壓時,按1mol/L NaOH溶液5min,二次水5min,1mmol/L nah2po4-na2hpo4 1:1緩沖液5min,沖洗過程中,出口應與廢液的位置相一致不應升起支架。
2、混合標準樣品的制備
同時測定了標準樣品中苯甲酸的濃度。分別為5、1、2、5和1mg/ml。
3、制作標準曲線
毛細管沖洗完畢后,取1ml混合好的標準樣品,放在塑料樣品管上,放在進樣架上的樣品位置上,調整出(出)口到緩沖液(緩沖液)上,抬起支架固定,開始進樣。注射壓力為3mbar,注射時間為5s。注射后,將入口支架的位置改回緩沖溶液,記住要回到緩沖位置!選擇方法24CE.mtw公司,修改適當?shù)奈募f明,然后開始分析,電壓25kV,時間約1min。
4、未知濃度混合樣品的測定
方法和條件同上。對未知濃度的樣品進行檢測,分析時間約為25min,根據(jù)苯甲酸鈉的標準曲線測定雪碧和醒目飲料中苯甲酸鈉的含量。
5、不同緩沖溶液中遷移時間的變化
未知濃度混合樣品測定后,按1mol/L NaOH溶液5min,二次水5min,然后將進出口兩端緩沖液改為2mmol/L Na2B4O7 5min,在此條件下,將未知濃度的混合樣品在25kV電壓下測試約1min,按之前的順序再次沖洗毛細管,并再次更換進出口兩端的緩沖液,即1mmol/L nah2po4-na2hpo4,pH值為6,洗滌時間為5min,對未知濃度的混合樣品進行測試,電壓為25kv,時間約為15min。
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